科捷分享丨液相色谱柱安装与使用说明
HPLC剖析是体系的作业，每个环节都很重要；看似简略的环节，反而简单疏忽，引起整个试验的成果偏差，因而养成杰出的习气是很重要的。色谱柱是色谱体系的心脏，液相色谱柱的正确装置与运用，是色谱作业的要害；也是获得正确牢靠的试验数据的必经之路。
运用仪器: LC-600A液相色谱仪
一·液相色谱柱的装置
1 液相色谱柱的结构：
a．空柱由柱接头柱管及滤片拼装而成
柱接头选用低死体积结构，柱接头是两头螺纹组件，一端是为7/16英才外螺纹，另一端是3/16英才的内螺纹（国内外已规范化）。7/16英才外螺纹与1/4英寸柱管（￠6.35mm）衔接，中心放置压环用于密封。3/16英才的内螺纹与1/16英才（￠1.57mm）的衔接收衔接，之间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量削减柱外死体积，在装置色谱柱时，用￠1.57mm衔接收经过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后在拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉揉捏变形后紧箍在衔接收上（衔接收经过压环后显露的管长度应严格控制在2.5mm长或其他固定尺度。
在两头柱接头内，柱管两头各放置一片不锈钢滤片（或滤网），用于封堵柱填料不被活动相冲出柱外流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂效果。但含氯化物的溶剂对其有必定的腐蚀性，故运用时要留意，柱及衔接收内不能长期存留此类溶剂，以避免腐蚀。
b． 柱填料：
液相色谱柱的别离效果是在填料和活动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为填料。依据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3-10um的范围内。另一类正相填料是硅胶外表键合—CN，—NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：首要是以硅胶为基质，在其外表键合十八烷基官能团（ODS）的非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他反相填料还有键合C8，C4，C2，苯基等，其颗粒直径在3-10um之间。
2 色谱柱的装置
a． 拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型，尺度，出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
b． 拧下柱两头的密封堵头放回包装盒备用。
c． 按柱管上标明的活动相流向，将色谱柱的入口端经过衔接收与进样阀出口衔接（如条件允许，建议在柱前运用维护柱）；柱的出口与检测器衔接。衔接收是外径为.57mm、内径为0.1mm-0.3mm的不锈钢管。衔接收的两头均有空心螺钉及密封用压环。在接收时必定要设法下降柱外死体积。衔接收经过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动停止，再用扳手持续顺时针拧1/4-1/2圈，牢记不要用力太大。如色谱柱经过活动相加压后有漏夜现象，请用扳手顺时针拧1/4圈，直至不漏夜停止。
二·液相色谱柱的运用：
色谱柱在运用前，进行的柱的功用测验，并将成果保存起来，作为今后评价柱功用变化的参考。但要留意：柱功用或许因为所运用的样品、活动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外做柱功用测验时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测验所运用的条件是*条件），只要这样测验的成果才有可比性。
1 样品的前处理：
a． 运用活动相溶解样品。
b． 运用预处理柱除掉样品中的强极性或与柱填料发生不可逆吸附的杂质。
c． 运用0.45um的过滤膜除掉微粒杂质。
2 活动相的装备：
液相色谱是样品组分在柱填料与活动相之间质量交流而达到别离的意图，因而要求活动相具有以下的特色：
a． 活动相对样品具有必定的溶解能力，保证样品组分不会沉积在柱中（或长期保留在柱中）。
b． 活动相具有必定的惰性，与样品不发生化学反应（特殊情况在外）。
c． 活动相的黏度要尽量的小，以便在运用较长的剖析柱时能得到好的别离效果；同时下降柱压降，延伸液压泵的运用寿命（可运转提高温度的办法下降活动相的黏度）。
d． 活动相的化学性质要与运用的检测器相适应。如用UV检测器，运用对紫外吸收较低的溶剂制造。
e． 活动相的沸点不要太低，担任简单发生气泡，导致试验无法进行。
f． 在活动相装备好后，必定进行脱气。除掉溶解在活动相中的微量气体既有利于检测，还可以避免活动相中的微量氧与样品发生效果。
3 活动相流速的挑选：
因柱效是柱中活动相线性流速的函数，运用不同的流速可得到不同的柱效。关于一根特定的色谱柱，要追求*柱效，运用*流速。对内径为4.6 mm的色谱柱，流速一般挑选1ml/min，关于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。
当选用*流速时，剖析时刻或许延伸。可选用改变活动相的洗刷强度的办法以缩短剖析时刻（如反相柱时，可适当添加甲醇或乙腈的含量）。
留意：
1）.因为甲醇的廉价，关于反相柱推荐运用甲醇体系（有必要运用乙腈的在外）。
2）.关于正相柱推荐运用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的乙烷做活动相，没有提纯的乙烷不的运用。用水运用超纯水（电阻率大于18兆欧），去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有或许影响剖析的成果。
3）.含水活动相在试验前制造，尤其是夏天运用缓冲溶液作为活动相不要过夜。加入*，避免细菌的生长。
4）.活动相要求运用0.45um滤膜过滤，除掉微粒杂质。
5）.运用HPLC级溶剂装备活动相，运用合适的活动相可延伸色谱柱的运用寿命，提高柱功用。
4 柱功用的测验：
——启动液相色谱仪：a. 活动相流速设定为1ml/min。
b．UV检测器波长设定为254nm。
——运用出厂测验时运用的活动相组成及测验样品。
——记录并计算测验成果。
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